1.明场
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明场显微镜是一种众所周知的显微方法,广泛用于病理学和检查,用于观察染色切片。所有的显微镜都可以完成这个功能。
二。暗场观察(暗场)
暗场实际上是暗场照明。它的特点不同于明场,它观察被检查物体反射或衍射的光,而不是直接观察照明光。因此,视野变成了黑暗的背景,被检查的对象看起来很亮。
暗场原理是基于光学系统的廷代尔现象。当强光衍射产生的强光直接通过时,人眼无法观察到尘埃颗粒。当光线倾斜时,光线的反射会导致颗粒变大并变得人眼可见。
m..m暗场观察所需的特殊附件是暗场聚光镜。其特点是光束不自下而上穿过被检物,而是改变光路,使其斜向被检物,照明光不直接进入。它是一种物镜,由被检物体表面的光反射或衍射而成。明亮的图像。暗场观察的分辨率远高于明场观察,0.02~0.004。
在光学显微镜的发展过程中,相差显微镜的发明成功是现代显微镜技术的一项重要成就。我们知道,人眼只能区分光波的波长(颜色)和幅度(亮度)。在无色透明的生物样品的情况下,即使有光通过,波长和幅度也不会发生太大变化,这是困难的。在明亮的视野中观察样品。可以解析为人眼无法解析的幅度差异的差异。无色透明的物质也将清晰可见。这使得观察活细胞变得非常容易,因此相差显微镜被广泛用于倒置显微镜。
相差显微镜的基本原理是将通过样品的可见光的光程差转化为光程差。幅度的差异提高了不同结构之间的对比度,并使不同结构清晰可见。通过样品后,光线发生折射,偏离原来的光路,延迟了1/4λ(波长)。增加、增加或减少幅度,并增加对比度。相差显微镜具有两个结构上不同于普通光学显微镜的特点。
1.光源和聚光器之间有一个环形光阑(annularmembrane),其作用是通过聚光器的光形成一个中空的光锥,聚焦在样品上。
2、相位片(环形相位片)在物镜上加了一层涂有氟化镁的相位片。这允许直接或衍射光的相位延迟1/4λ。有两种类型:
1.A+相位板:直射光延迟1/4λ,轴合后两组光波的光波合流,振幅增大,样品结构比周围介质更亮。,形成鲜明对比(或负对比)。
2.B+相位板:将衍射光延迟1/4λ,将两组光波组合并减去光波,形成幅度变小反差变暗(或正反差)的结构。比周围的介质更暗、更易变
四。微分干涉对比DIC
1960年代推出的微分干涉显微镜不仅可以让您观察无色透明的物体,还可以赋予图像强烈的立体效果并具有相位差。显微镜无法达到的优势和观察效果更加真实。
原则;
微分干涉显微镜使用特殊的沃拉斯顿棱镜分解光束。分梁的振动方向相互垂直,强度相同。光束在两个非常接近的点通过待检查对象,尽管它们的相位略有不同。由于两束光的分割距离很小,不会出现重影现象,图像具有立体效果。
DIC显微镜的物理原理与相差显微镜完全不同,技术设计要复杂得多。D该IC采用偏振,并配备了四个特殊的光学元件:偏振元件、DIC棱镜、DIC滑块和检偏器。分光器直接安装在聚光系统的前面,对光进行线性偏振。电容器中安装了一个喇嘛棱镜(DIC棱镜),这个棱镜可以分解成两条偏振方向不同的射线(x和y),并且两者形成一个小角度。聚光镜使两条平行于显微镜光轴的光线对齐。前两条光线相位相同,经过样品的相邻区域后,由于样品厚度和折射率不同,两条光线具有光程差。第二个喇嘛棱镜,即DIC滑翔机,连接到物镜的后焦平面,并将两个光波合二为一。
此时,两束光束的偏振面(x和y)仍然存在。最后的光束通过第二个偏振设备,分析仪。在光束形成目镜的DIC图像之前,分析仪与换能器的方向成直角。分析仪将两个垂直光波组合成两个具有相同偏振平面的光束并对其进行干涉。x和y波之间的光程差决定了通过的光量。如果光程差为0,则光不通过检偏器。当光程差等于波长的一半时,透射光达到最大值。因此,在灰色背景下,标本的结构显示出明暗之间的差异。要优化图像的对比度,可以通过调节DIC滑块的垂直微调来改变光程差,也可以通过光程差改变图像的亮度。调整DIC滑块以在样品的微观结构上显示正或负投影图像。通常一侧是亮的,另一侧是暗的,为标本创造了一种人造的3D印象,就像大理石浮雕一样。n
5、偏光显微镜(偏光显微镜)
偏光显微镜的特点
偏光显微镜是用于识别物质微观结构的光学特性的显微镜。所有具有双折射的物质都可以用偏光显微镜清楚地区分。当然,这些物质可以在染发中观察到,但有些是不可能的,需要使用极化。显微镜。
偏光显微镜的一个特点是它们将普通光转换为偏光进行显微镜检查,以确定特定物质是单向(全向)还是双折射(各向异性)。
双折射是晶体的基本特性。因此,偏光显微镜广泛应用于矿物、化学等领域。它也可以应用于生物学和植物学。
6.浮雕对比显微镜(RC)
由罗伯特霍夫曼博士于1975年发明
一种于2002年到期的显微镜,以各种显微镜制造商的名字命名。RC技术产品
原则
对角线光照射样品产生折射和衍射,光线通过物镜的光密度梯度调节器。不同的阴影,因为透明样品的表面会产生明暗差异并增强观察对比度。
功能
提高未染色标本的可见度和对比度;
显示没有图像晕圈或近似3D结构的阴影;
可检测双折射物质(岩片、水晶、骨头);
可以检测玻璃、塑料和其他培养细胞、器官和组织的培养皿;
冷凝器的工作距离可以设计得更长;
RC物镜也可用于明场、暗场和荧光观察
7:荧光显微镜
荧光显微镜是一种使用短波长光的技术。用荧光素染色的对象在被观察之前被照射并激发以产生长波长荧光。
优势:
•高检测能力(放大)
•对细胞的刺激性较小(可在体内染色)
•可复用染色
目的:
•观察物体结构——荧光素
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